7-AAD 7-氨基放線菌素 D是用于檢測細(xì)胞凋亡的試劑，7-氨基放線菌素D（7-AAD）是一種非滲透性染料，可用于鑒定死細(xì)胞。染料可以進(jìn)入具有受損質(zhì)膜或受損/無細(xì)胞代謝的細(xì)胞。 一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，染料與細(xì)胞內(nèi)DNA結(jié)合，產(chǎn)生高度熒光的結(jié)合物，這些結(jié)合物將細(xì)胞鑒定為無活力。 它廣泛用于流式細(xì)胞術(shù)。 7-AAD可以被488nm激光氬激光線激發(fā)，熒光檢測到650nm以上。 盡管7-AAD的發(fā)射強(qiáng)度低于碘化丙錠（PI），但由于光譜重疊小，因此與其他488 nm激發(fā)的熒光染料（如FITC和PE）相結(jié)合，更長的發(fā)射波長使其更適用于多重測定。

染色細(xì)胞分析方案

        通常7-AAD染色的染色在細(xì)胞染色的最后一步，并且它只能染死細(xì)胞。 以下程序適用于大多數(shù)細(xì)胞類型。 生長培養(yǎng)基，細(xì)胞密度，細(xì)胞類型和其他因素可能會影響染色。玻璃器皿上的殘留洗滌劑也可能影響許多生物的染色，導(dǎo)致在沒有細(xì)胞存在的溶液中出現(xiàn)明亮染色的物質(zhì)。

1）制備1-10mM DMSO儲備溶液。如果儲存在-20°C，DMSO儲備液可以保存6個月。

2）使用適合您樣品的固定方案。

3）通過離心沉淀細(xì)胞，并將細(xì)胞重懸于緩沖鹽溶液或培養(yǎng)基中，在pH 7.4下進(jìn)行最佳染料染色。 培養(yǎng)物中的貼壁細(xì)胞可以在蓋玻片上或細(xì)胞培養(yǎng)孔中原位染色。

4）使用0.5至5μM的濃度添加7-AAD染色，并將其孵育15至60分鐘。

注意：在最初的實(shí)驗(yàn)中，最好在整個建議的范圍內(nèi)嘗試幾種染料濃度，以確定產(chǎn)生最佳染色的濃度。

5）在Ex / Em = 545 / 650nm處測量熒光強(qiáng)度（使用FL3進(jìn)行流式細(xì)胞分析）

注意：7-AAD是一種潛在的致癌物質(zhì)。 建議用戶戴上手套，防護(hù)服和眼睛/面部保護(hù)裝置，以免接觸皮膚和眼睛。