MycoLight 快速熒光革蘭氏陽性細菌染色試劑盒提供了一種新穎的一步熒光測定法，用于確定活菌中的革蘭氏菌。革蘭氏染色是在臨床和研究環(huán)境中對細菌進行分類的重要且廣泛使用的方法。原始方法涉及很多步驟，例如熱固定，兩步染色方案，酒精提取和復(fù)染。這些步驟可能會導(dǎo)致不一致的染色。 該試劑盒使用了熒光標(biāo)記的伴刀豆球蛋白A（ConA），這是一種凝集素，可選擇性地與暴露于革蘭氏陽性細菌表面的N-乙酰氨基葡糖結(jié)合。當(dāng)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌用熒光標(biāo)記的ConA共軛物染色時，只有革蘭氏陽性菌發(fā)出紅色熒光。染色的細菌可以通過熒光監(jiān)測。因為與其他現(xiàn)有染料相比，我們試劑盒中使用的熒光標(biāo)記ConA共軛物顯示出更高的亮度和光穩(wěn)定性。

樣品示例及操作

1.細菌樣品的制備

1.1在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中使細菌生長到對數(shù)后期。 準(zhǔn)備細菌樣品，濃度范圍為10⁶到10⁸個細胞/ mL。 注意：在波長= 600 nm（OD600）處測量細菌培養(yǎng)物的光密度，以確定細胞數(shù)。 對于大腸桿菌培養(yǎng)，OD600 = 1.0等于8 x 10⁸細胞/ mL。

1.2通過以10,000 x g離心5分鐘除去培養(yǎng)基，然后將沉淀重新懸浮在測定緩沖液（組分B）中。

2.染色方案

2.1向100 μL細菌樣品中加入1 μL IF647-ConA儲備溶液（100X）。

2.2充分混合，然后在室溫下于黑暗中孵育5-15分鐘。

2.3以10,000 x g離心5分鐘，然后除去IF647-ConA染色溶液。

2.4重懸于100 μL分析緩沖液（組分B）中。

2.5使用熒光顯微鏡通過Cy5（Ex / Em = 650/669 nm）通道監(jiān)控細菌的熒光。 注意：該協(xié)議僅提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)不同的細菌菌株或其他特定需求進行優(yōu)化。 如果觀察到更高的背景，則可以在成像之前添加一個可選的檢測緩沖液（組分B）洗滌步驟。